WEBVTT Kind: captions Language: es 00:00:00.950 --> 00:00:09.219 De acuerdo, soy un inmunólogo de leche humana en Mount Sinai en Nueva York. Hoy voy a hablarles 00:00:09.219 --> 00:00:17.320 de nuestro trabajo sobre la respuesta inmune de la leche humana a la infección por SARS-CoV2. 00:00:17.320 --> 00:00:22.539 Así que solo porque no todo el mundo viene del mismo fondo, voy a dar un poco de antecedentes 00:00:22.539 --> 00:00:26.510 sobre los anticuerpos y otras partes del sistema inmunológico en general. Así que los anticuerpos 00:00:26.510 --> 00:00:31.009 son una proteína protectora producida por las células B en respuesta a la presencia 00:00:31.009 --> 00:00:35.050 de una sustancia extraña. Reconocen y se adhieren a la sustancia extraña para que 00:00:35.050 --> 00:00:41.910 puedan ser retirados del cuerpo. Cuando esta sustancia extraña entra en el cuerpo, el 00:00:41.910 --> 00:00:48.010 sistema inmunológico lo reconoce porque sus proteínas difieren del yo y cualquier anticuerpo 00:00:48.010 --> 00:00:55.670 que pueda reaccionar con el yo no está presente y eliminado como parte del desarrollo del 00:00:55.670 --> 00:01:02.219 sistema inmunológico. Así que esas proteínas de un elemento extraño, como un virus, son 00:01:02.219 --> 00:01:07.590 muy diferentes de nuestras propias proteínas. Un anticuerpo tiene dos lados. Tiene el lado 00:01:07.590 --> 00:01:13.860 variable donde se ve el Vs aquí. Eso es lo que contacta al patógeno como SARS-CoV2, 00:01:13.860 --> 00:01:19.110 COVID-19. Esos son diferentes para cada anticuerpo - es un poco diferente. Es una región variable 00:01:19.110 --> 00:01:24.750 y así es como reconocen una proteína extraña. Luego este otro lado es la región constante 00:01:24.750 --> 00:01:28.560 o la región FC y eso es lo que mediará algunas otras actividades antivirales y se unirá 00:01:28.560 --> 00:01:33.930 a los receptores en algunas de las células de nuestro sistema inmunológico. 00:01:33.930 --> 00:01:38.350 Así que hay diferentes sabores de anticuerpos. Voy a hablar principalmente de IgA hoy porque 00:01:38.350 --> 00:01:45.450 IgA es aproximadamente el 90% de los anticuerpos en la leche. Pero en el suero - así que en 00:01:45.450 --> 00:01:57.170 nuestra sangre se oye sobre todo acerca de IgG, así que eso es lo que es dominante en 00:01:57.170 --> 00:02:02.259 el suero. Luego hay otros sabores en los que no entraré hoy, pero solo para que sepas 00:02:02.259 --> 00:02:08.890 que hay muchos tipos diferentes de anticuerpos y no es tan simple decir anticuerpos y terminar 00:02:08.890 --> 00:02:14.210 con ello. Hay de muchos tipos. En la leche humana, el anticuerpo, como dije 00:02:14.210 --> 00:02:20.770 es, cerca de 90% IgA. Sobre todo, como dímero, significando dos IgAs atados juntos. La mayor 00:02:20.770 --> 00:02:28.000 parte de eso va a estar en forma secretora. Los anticuerpos secretores son poliméricos, 00:02:28.000 --> 00:02:31.720 lo que significa que tienen diferentes tipos de proteínas combinadas. En este caso, son 00:02:31.720 --> 00:02:38.459 un dímero que es principalmente cómo se encuentra IgA en la leche. Va a estar unido 00:02:38.459 --> 00:02:44.769 por otra proteína llamada cadena J que es hecha por las células B y luego envuelta 00:02:44.769 --> 00:02:47.959 en un componente secretor. Añado que esto es una pequeña caricatura 00:02:47.959 --> 00:02:55.030 de eso. Hay dos tipos de IgA - no voy a entrar en eso hoy - pero están estructurados un 00:02:55.030 --> 00:02:59.750 poco diferentes y IgA-1 es dominante. Así que aquí se ve un dímero que es complejo 00:02:59.750 --> 00:03:06.890 por j-cadena que es hecha por las células B y eso es principalmente lo que se encuentra 00:03:06.890 --> 00:03:14.569 en la leche en términos de la composición total. Luego se envuelve como parte de su 00:03:14.569 --> 00:03:19.020 secreción en la leche en este componente secretor. Por lo tanto, el componente secretorio 00:03:19.020 --> 00:03:23.810 es crítico para la protección contra la degradación y los entornos mucosos duros 00:03:23.810 --> 00:03:28.670 como la leche, como la cavidad nasal oral de los bebés y especialmente el tracto gastrointestinal. 00:03:28.670 --> 00:03:34.409 Así que evolucionamos para tener esta forma altamente protegida de anticuerpos en nuestros 00:03:34.409 --> 00:03:38.870 fluidos mucosos porque son relativamente duros en comparación con el suero. Lo interesante 00:03:38.870 --> 00:03:44.780 es que una cosa que estamos explorando en mi laboratorio es que la IgA secretora derivada 00:03:44.780 --> 00:03:50.970 de la leche - porque se puede obtener leche en grandes cantidades - como una clase terapéutica 00:03:50.970 --> 00:03:54.989 de anticuerpos contra COVID u otros patógenos puede ser altamente eficiente cuando se necesita 00:03:54.989 --> 00:03:58.670 que esos anticuerpos sean duraderos en los entornos de mucosa áspera como el tracto 00:03:58.670 --> 00:04:02.360 respiratorio o el tracto gastrointestinal. Anticuerpos secretorios - usted no tiene que 00:04:02.360 --> 00:04:10.280 conseguir demasiado envuelto en este diagrama, pero como dije y para los que están interesados, 00:04:10.280 --> 00:04:14.010 la forma en que obtienen su componente secretor es que en realidad cuando las células B transitan 00:04:14.010 --> 00:04:16.410 a la glándula mamaria y secretan ese dímero IgA cuando se bombea a la leche, una parte 00:04:16.410 --> 00:04:22.630 del receptor que bombea el IgA a la leche sale y esa es la cadena secretora. Eso es 00:04:22.630 --> 00:04:29.930 lo que envuelve la IgA. También tenemos IgG y otras formas en la leche. El IgT es cerca 00:04:29.930 --> 00:04:35.340 del 2% del total y eso va a venir generalmente del suero, viniendo adentro en la manera relativamente 00:04:35.340 --> 00:04:40.550 pasiva. Las células B que en última instancia producen leche secretora IgA en realidad se 00:04:40.550 --> 00:04:43.259 originan principalmente del intestino - del tejido linfático asociado al intestino. Esto 00:04:43.259 --> 00:04:48.250 se conoce como el enlace entero-mamario y se puede imaginar que este es un mecanismo 00:04:48.250 --> 00:04:52.419 evolucionado muy importante para ayudar a los bebés a sobrevivir en un entorno. A medida 00:04:52.419 --> 00:04:56.970 que evolucionamos o en entornos de bajos ingresos hoy en día donde la medicina moderna no está 00:04:56.970 --> 00:05:06.460 disponible y lo que la persona lactante inhala o ingiere en forma de patógeno, entonces 00:05:06.460 --> 00:05:11.470 una respuesta inmune se eleva en el intestino predominantemente y luego las células B del 00:05:11.470 --> 00:05:15.639 tránsito intestinal a través de la linfáticos a la glándula mamaria y así hacer anticuerpos 00:05:15.639 --> 00:05:24.780 que son altamente duraderos en la leche. Esto realmente protege al bebé de esos mismos 00:05:24.780 --> 00:05:27.330 patógenos y evita que el bebé muera de esos patógenos. 00:05:27.330 --> 00:05:32.650 ¿Qué es la inmunización pasiva? Cuando un bebé o un niño recibe leche humana no 00:05:32.650 --> 00:05:36.039 lo hacen - no es como si se estuvieran vacunando, no es como si se estuvieran infectando a sí 00:05:36.039 --> 00:05:40.730 mismos, pero es lo que llamamos inmunización pasiva. Esta protección anterior funciona 00:05:40.730 --> 00:05:45.569 recubriendo las membranas mucosas del área respiratoria superior de la boca del bebé 00:05:45.569 --> 00:05:50.980 y el tracto digestivo. Proporciona una capa de protección que puede impedir que las células 00:05:50.980 --> 00:05:59.380 de esa zona se infecten si el bebé está expuesto al virus. O puede mitigar esa infección, 00:05:59.380 --> 00:06:05.240 así que ralentiza la replicación viral. Este efecto es temporal y se espera que los 00:06:05.240 --> 00:06:10.509 anticuerpos se degraden o se laven en pocas horas. Esto tiene que ser rellenado con cada 00:06:10.509 --> 00:06:15.850 alimento. Los bebés obtienen su leche con mucha frecuencia, por lo que esto no debería 00:06:15.850 --> 00:06:20.819 ser un problema, pero el efecto va a depender de la dosis. Así que su bebé alimentado 00:06:20.819 --> 00:06:26.770 exclusivamente con leche materna que no recibe ningún otro alimento o líquido va a tener 00:06:26.770 --> 00:06:31.440 la capa más duradera de anticuerpos de leche. Entonces un niño que también está comiendo 00:06:31.440 --> 00:06:36.280 sólidos - no va a ser tan significativo de un efecto, relativamente hablando. Ahora bien, 00:06:36.280 --> 00:06:42.580 estos anticuerpos de la leche no pasan a través del sistema digestivo del bebé hacia el torrente 00:06:42.580 --> 00:06:48.110 sanguíneo. Usted no los detectaría en la sangre. Son una capa de las membranas mucosas. 00:06:48.110 --> 00:06:51.560 Nuestros estudios COVID-19 - tenemos dos de ellos. Fui financiado con un R01 para nuestro 00:06:51.560 --> 00:06:55.020 estudio de infección en 2020 como parte de la financiación de emergencia. También tenemos 00:06:55.020 --> 00:06:59.930 un estudio de la vacuna que voy a mencionar al final de mi presentación. Para nuestro 00:06:59.930 --> 00:07:04.900 estudio de infección, los participantes tuvieron una infección por PCR confirmada por SARS-CoV2. 00:07:04.900 --> 00:07:10.660 Para nuestro estudio de vacunas fueron vacunados, pero eso es un estudio separado. Pedimos alrededor 00:07:10.660 --> 00:07:18.650 de 30 mls o 1 oz de leche por muestra usando cualquier bomba que estos participantes tenían 00:07:18.650 --> 00:07:24.770 en casa y estaban cómodos con. La leche fue bombeada en casa de acuerdo con 00:07:24.770 --> 00:07:28.449 un horario que solicitamos. Fue etiquetado y congelado en casa y luego recogido, originalmente 00:07:28.449 --> 00:07:34.699 por mí, durante el cierre y luego por mensajería o envío por Milk Stork - una empresa de transporte 00:07:34.699 --> 00:07:39.300 de leche. Luego se diseñó como un estudio longitudinal para que la leche se obtuviera 00:07:39.300 --> 00:07:44.979 originalmente de tres a seis semanas después de la infección y luego se pidió a los participantes 00:07:44.979 --> 00:07:48.610 que continuaran extrayendo muestras mensuales durante el tiempo que pudieran. 00:07:48.610 --> 00:07:53.130 Inicialmente, para mostrarle los resultados de nuestro estudio de infección COVID, en 00:07:53.130 --> 00:07:57.880 un subconjunto de muestras tenemos muchas muchas muestras tenemos cientos y cientos 00:07:57.880 --> 00:08:03.620 de participantes. En esta parte del estudio, analizamos la leche procesada sin diluir. 00:08:03.620 --> 00:08:10.580 Así que solo centrifugamos la leche para eliminar la grasa y las células y mantenemos 00:08:10.580 --> 00:08:20.050 la fracción de leche descremada que es lo que probamos. Analizamos a 75 participantes 00:08:20.050 --> 00:08:26.759 recuperados de COVID-19 y también utilizamos 20 muestras de leche pre-pandémica de otros 00:08:26.759 --> 00:08:31.770 estudios para formar un corte positivo en términos de anticuerpos contra el pico COVID-19. 00:08:31.770 --> 00:08:37.000 Utilizamos un ELISA que es un método muy probado y probado para ver la respuesta de 00:08:37.000 --> 00:08:40.110 anticuerpos en una solución de cualquier líquido contra cualquier proteína de interés. 00:08:40.110 --> 00:08:47.399 Obtenemos proteína recombinante, la codificamos en una placa de ensayo de plástico, y esencialmente 00:08:47.399 --> 00:08:52.080 solo miramos la respuesta de la leche contra esa proteína de pico. Podemos cuantificar 00:08:52.080 --> 00:08:54.750 cuánto anticuerpo hay. Mirando a 75 personas - esta línea punteada 00:08:54.750 --> 00:09:00.300 es nuestro corte positivo que se basa en nuestros niveles de fondo de control pre-pandémico 00:09:00.300 --> 00:09:05.050 en este ELISA - encontramos que casi el 90% de las muestras de leche obtenidas de estos 00:09:05.050 --> 00:09:10.260 donantes recuperados de COVID-19 tenían niveles significativos de IgA específica de SARS-CoV-2. 00:09:10.260 --> 00:09:14.170 Este es un nivel de corte positivo absoluto, así que si tiene muestras de antes de una 00:09:14.170 --> 00:09:21.860 infección que no lo hicimos en el momento de este subconjunto y se puede comparar el 00:09:21.860 --> 00:09:28.459 aumento relativo para individuos particulares, En realidad es mucho más como un cien por 00:09:28.459 --> 00:09:34.510 ciento de las personas tienen una respuesta después de la infección. Nuestro límite 00:09:34.510 --> 00:09:38.740 absoluto es bastante estricto, así que en ese sentido es alrededor del 90% más allá 00:09:38.740 --> 00:09:41.310 del límite absoluto para la positividad. Este cribado inicial 40 de las muestras de 00:09:41.310 --> 00:09:47.250 spike positivo fueron tituladas, por lo que se diluyó en serie para encontrar el título 00:09:47.250 --> 00:09:53.870 final de unión, por lo que esta es una evaluación de la afinidad y o cantidad de anticuerpos. 00:09:53.870 --> 00:09:58.161 La manera que usted hace eso como usted es usted mira básicamente qué dilución de 00:09:58.161 --> 00:10:08.540 la leche da un valor óptico de la densidad de uno así que la cantidad de luz en este 00:10:08.540 --> 00:10:14.500 ensayo de ELISA. Luego puede ver que cada uno de estos es la curva de dilución. Se 00:10:14.500 --> 00:10:20.200 puede ver cada muestra de leche, aunque positiva, se ve muy diferente porque la calidad de la 00:10:20.200 --> 00:10:24.749 respuesta difiere. Así que lo que encontramos es que de estas 40 muestras que fueron positivas 00:10:24.749 --> 00:10:30.959 en la pantalla, el 95% de ellas tenían un título de punto final positivo, por lo que 00:10:30.959 --> 00:10:35.480 eran de alta calidad. Alrededor de la mitad de esos eran lo que consideramos alto título, 00:10:35.480 --> 00:10:40.639 por lo que una alta calidad o cantidad de anticuerpos en la muestra, que es aproximadamente 00:10:40.639 --> 00:10:45.350 cinco veces el punto final de corte del título. Alrededor del 95% también tenía anticuerpos 00:10:45.350 --> 00:10:50.250 secretores específicos de picos, que por supuesto nos interesa mucho porque es la clase 00:10:50.250 --> 00:10:55.670 más duradera de anticuerpos en la leche. Cuando hacemos nuestro anticuerpo secretorio 00:10:55.670 --> 00:11:00.190 ELISA buscamos anticuerpos. Buscamos componentes secretores para que puedan estar en IgA, podría 00:11:00.190 --> 00:11:05.790 estar en IgM, que también tiene una forma secretora. Podría ser algún otro artefacto 00:11:05.790 --> 00:11:10.680 extraño como el componente de secretaria flotante pero eso es mucho menos probable. 00:11:10.680 --> 00:11:16.500 Pero solo porque medimos IgA no significa que sepamos que es IgA secretora hasta que 00:11:16.500 --> 00:11:21.250 también midamos anticuerpos secretorios y comparemos esos datos. Lo que también encontramos 00:11:21.250 --> 00:11:26.910 fue que alrededor del 75% de estas muestras contenían IgG específica de picos, que es 00:11:26.910 --> 00:11:33.079 la forma dominante y el suero, pero también se puede detectar en la leche. Fue muy bajo 00:11:33.079 --> 00:11:37.360 y como se puede ver solo acerca de realmente uno más allá de nuestro corte de alto título 00:11:37.360 --> 00:11:42.180 y fue generalmente una respuesta IgG bajo título. Pero es difícil detectar IgG en 00:11:42.180 --> 00:11:46.019 la leche porque en general muy poco está en la leche. 00:11:46.019 --> 00:11:50.459 Era muy importante era que encontramos que el IgA y los títulos secretorios del anticuerpo 00:11:50.459 --> 00:11:53.639 eran altamente correlacionados que sugirieron fuertemente que la mayoría o casi toda la 00:11:53.639 --> 00:11:57.149 IgA estaba en forma secretora. Esto es muy importante para la protección potencial del 00:11:57.149 --> 00:11:59.200 bebé. También realizamos los ensayos de la neutralización que miraron la capacidad 00:11:59.200 --> 00:12:01.200 de estos anticuerpos de bloquear realmente la infección del SARS-CoV-2. Esto fue usando 00:12:01.200 --> 00:12:06.649 un pseudovirus que es un virus inofensivo que se ha hecho para tener el pico SARS-CoV-2 00:12:06.649 --> 00:12:10.410 unido a él y así podemos medir lo bien que los anticuerpos bloquean la infección. Lo 00:12:10.410 --> 00:12:16.420 que encontramos fue que había una potente actividad neutralizadora de COVID que se correlacionaba 00:12:16.420 --> 00:12:22.480 fuertemente con la cantidad de IgA secretora en la muestra. 00:12:22.480 --> 00:12:25.740 Luego, finalmente, lo que encontramos más recientemente, que es muy importante, es que 00:12:25.740 --> 00:12:33.399 la respuesta a la infección por IgA secretora de leche es muy duradera con el tiempo. Cuando 00:12:33.399 --> 00:12:38.510 tenemos puntos de tiempo de hasta 12 meses después de la infección, lo que se puede 00:12:38.510 --> 00:12:44.240 ver es que apenas hay un cambio significativo en estas 20 personas o así que hemos mirado 00:12:44.240 --> 00:12:48.839 hasta ahora. Se puede ver que cuando hacemos el análisis estadístico no hay cambio entre 00:12:48.839 --> 00:12:53.230 estos grupos en ningún momento en términos del título de punto final para la IgA secretora. 00:12:53.230 --> 00:13:01.620 Esta es una respuesta muy duradera en el tiempo después de la infección. 00:13:01.620 --> 00:13:04.940 Para resumir: la respuesta a la infección post-COVID-19 es la IgA secretora dominante 00:13:04.940 --> 00:13:09.579 que realmente es una respuesta clásica a la infección de la mucosa. La IgA secretora 00:13:09.579 --> 00:13:15.540 se neutraliza y es muy, muy duradera en el tiempo. No te lo mostré, pero te diré que 00:13:15.540 --> 00:13:23.139 la respuesta a la vacuna post COVID-19 es en realidad IgG dominante. Es una respuesta 00:13:23.139 --> 00:13:28.720 de inyección intramuscular clásica que no sigue esta vía mucosa en absoluto. Las vacunas 00:13:28.720 --> 00:13:34.139 contra la adenobasa como J&J y AstraZeneca tuvieron respuestas muy pobres en la leche. 00:13:34.139 --> 00:13:38.519 En realidad, se encontraron títulos muy bajos y anticuerpos secretores muy bajos para cualquier 00:13:38.519 --> 00:13:45.810 tipo de vacuna y su durabilidad fue muy limitada a lo largo del tiempo. Por lo tanto, un fuerte 00:13:45.810 --> 00:13:53.420 contraste con la respuesta a la infección de la mucosa la respuesta de inyección intramuscular 00:13:53.420 --> 00:13:59.639 fue realmente diferente y no muy duradera. Así que lo que realmente nos dice es que 00:13:59.639 --> 00:14:04.149 las vacunas que provocan una potente respuesta de IgA secretora como su respuesta clásica 00:14:04.149 --> 00:14:10.019 a la infección de la mucosa - esas vacunas son realmente necesarias. Esa es una de las 00:14:10.019 --> 00:14:15.250 metas generales de mi laboratorio es - diseñar esas vacunas con la población lactante en 00:14:15.250 --> 00:14:20.110 mente. Tenemos algunos estudios preliminares en animales hacia esa meta ahora mismo. 00:14:20.110 --> 00:14:22.540 Me gustaría agradecer a todos en mi laboratorio el Laboratorio Kramer por la proteína Medela 00:14:22.540 --> 00:14:26.139 por apoyar inicialmente los costos de envío de leche por Milk Stork. Estoy apoyado por 00:14:26.139 --> 00:14:27.209 el NIH y por supuesto nuestros donantes de leche. Gracias.