WEBVTT Kind: captions Language: fr 00:00:06.779 --> 00:00:15.730 Bonjour à tous et merci aux organisateurs. 00:00:15.730 --> 00:00:28.370 Mon sujet porte sur le peptide de fusion SARS-CoV-2, qui est plutôt une étude bio-physique. 00:00:28.370 --> 00:00:35.309 C'est ainsi que le virus du SRAS pénètre dans les cellules de l'hôte. 00:00:35.309 --> 00:00:41.190 Il s'agit d'un processus commun à de nombreux virus à enveloppe. 00:00:41.190 --> 00:00:46.270 Le virus s'attache d'abord aux récepteurs de la membrane cellulaire, puis il peut emprunter 00:00:46.270 --> 00:00:47.270 deux voies. 00:00:47.270 --> 00:00:49.900 La première consiste à traverser la membrane plasmique. 00:00:49.900 --> 00:00:56.030 Il y a donc fusion entre l'enveloppe du virus et la membrane plasmique. 00:00:56.030 --> 00:01:04.640 Ensuite, le virus est d'abord englouti par la cellule hôte pour aller dans l'endosome, 00:01:04.640 --> 00:01:10.550 puis la fusion entre la membrane endosomale et l'enveloppe virale libère le matériel 00:01:10.550 --> 00:01:13.780 génétique dans la cellule hôte. 00:01:13.780 --> 00:01:17.470 Au cours de ce processus, la protéine spike ou d'autres protéines similaires ou d'autres 00:01:17.470 --> 00:01:18.470 virus sont très importants. 00:01:18.470 --> 00:01:21.200 Fondamentalement, la protéine spike est un trimère d'hétérodimères S1-S2. 00:01:21.200 --> 00:01:28.640 La S1 est responsable de la liaison des récepteurs et la sous-unité S2 est responsable de la 00:01:28.640 --> 00:01:29.680 fusion des membranes. 00:01:29.680 --> 00:01:36.650 Comme nous pouvons le voir ici, une toute petite partie, que nous appelons le peptide 00:01:36.650 --> 00:01:39.970 de fusion, est insérée dans la membrane. 00:01:39.970 --> 00:01:44.320 Cette insertion est très importante car elle déclenche la fusion membranaire, une étape 00:01:44.320 --> 00:01:45.540 indispensable à l'infection virale. 00:01:45.540 --> 00:01:47.680 C'est pourquoi nous devons découvrir le mécanisme d'interaction du peptide de distribution avec 00:01:47.680 --> 00:01:52.010 la membrane et la manière dont il déclenche la fusion membranaire. 00:01:52.010 --> 00:01:57.341 La méthode que nous utilisons principalement est celle que nous appelons ESR [vitesse de 00:01:57.341 --> 00:01:58.680 sédimentation des érythrocytes], c'est-à-dire la méthode du spectromètre magnétique. 00:01:58.680 --> 00:02:04.720 En gros, nous voulons placer des lipides marqués par un spin libre sur la membrane, comme nous 00:02:04.720 --> 00:02:08.330 le montrons ici, et ce faisceau localisera nos différentes positions dans la membrane. 00:02:08.330 --> 00:02:13.870 Ensuite, nous mélangeons le peptide de fusion à la membrane et détectons le changement 00:02:13.870 --> 00:02:19.370 de structure de la membrane, qui est reflété par le spectre. 00:02:19.370 --> 00:02:24.580 Nous recueillons donc ce spectre, puis nous répétons l'expérience en fonction de la 00:02:24.580 --> 00:02:25.730 concentration du peptide. 00:02:25.730 --> 00:02:34.560 Ensuite, à partir de ce spectre, nous effectuons une simulation et nous extrayons les paramètres. 00:02:34.560 --> 00:02:40.140 L'un des paramètres les plus importants dans cette étude est appelé paramètre d'ordre. 00:02:40.140 --> 00:02:45.720 Comme vous pouvez le voir sur cette figure, si la concentration du peptide augmente, le 00:02:45.720 --> 00:02:50.480 x n'augmente pas beaucoup non plus et il y a donc un saut de type x. 00:02:50.480 --> 00:02:54.690 Nous avons répété cette expérience pour un très grand nombre de peptides. 00:02:54.690 --> 00:03:00.290 Nous avons répété cette expérience pour une très large gamme de peptides de fusion 00:03:00.290 --> 00:03:07.170 de virus et ce que nous avons constaté, c'est que le peptide de fusion actif induit cette 00:03:07.170 --> 00:03:13.150 forme de saleté, alors que les mutants et les mutants non actifs ne peuvent pas induire 00:03:13.150 --> 00:03:14.640 ce type de saleté. 00:03:14.640 --> 00:03:18.909 Nous pensons donc que cet effet d'ordonnancement de la membrane est une condition préalable 00:03:18.909 --> 00:03:19.909 à la fusion membranaire dans le processus d'entrée virale. 00:03:19.909 --> 00:03:22.300 Lorsqu'il s'agit de la glycoprotéine SARS-CoV, la protéine S, il est un peu difficile de 00:03:22.300 --> 00:03:28.830 déterminer quelle partie est le peptide de fusion, car la protéine S du SARS COVID possède 00:03:28.830 --> 00:03:30.900 plusieurs sites de clivage distincts. 00:03:30.900 --> 00:03:37.920 Les plus importants sont l'outil que nous appelons le côté S1H2 et le côté primaire 00:03:37.920 --> 00:03:40.450 S2, que l'on voit ici. 00:03:40.450 --> 00:03:47.170 La première chose à faire est donc de déterminer lequel est le véritable peptide de fusion. 00:03:47.170 --> 00:03:54.000 En fait, nous avons plusieurs candidats et si nous les plaçons dans un système artificiel, 00:03:54.000 --> 00:04:00.180 ils peuvent induire une sorte de fusion membranaire artificielle. 00:04:00.180 --> 00:04:03.700 C'est donc très... ce n'est pas très efficace. 00:04:03.700 --> 00:04:05.950 Ils utilisent la méthode traditionnelle. 00:04:05.950 --> 00:04:11.489 C'est pourquoi nous pensons que l'ordre de la membrane peut être un critère permettant 00:04:11.489 --> 00:04:13.629 d'identifier le véritable peptide de fusion. 00:04:13.629 --> 00:04:27.680 Ce que nous constatons ici, c'est que le FP1 peut montrer un saut très significatif alors 00:04:27.680 --> 00:04:33.320 que les deux autres candidats ne peuvent pas avoir ce genre de degré d'augmentation. 00:04:33.320 --> 00:04:38.530 Ainsi, nous pouvons finalement identifier - déterminer que le FP1 qui se trouve immédiatement 00:04:38.530 --> 00:04:44.970 après le site de clivage de la position primaire S2 est le véritable peptide de fusion. 00:04:44.970 --> 00:04:50.360 Au cours de ce processus, nous avons également découvert une chose très intéressante qui 00:04:50.360 --> 00:04:54.410 n'est pas rare dans le virus - qui dépend du calcium. 00:04:54.410 --> 00:05:04.630 Ainsi, comme vous pouvez le voir ici, sans calcium, il n'y a pas de saut important. 00:05:04.630 --> 00:05:14.640 Et ici, si nous fixons la concentration du peptide de fusion et augmentons la concentration 00:05:14.640 --> 00:05:19.000 de calcium, nous pouvons voir que le calcium augmente de manière significative la capacité 00:05:19.000 --> 00:05:24.831 du peptide de fusion à induire la mise en ordre de la membrane. 00:05:24.831 --> 00:05:29.520 En ce qui concerne le peptide de fusion du SRAS-2, nous comparons d'abord la séquence 00:05:29.520 --> 00:05:34.340 du SRAS avec celles du SRAS-1, du SRAS-2 et du MERS et nous identifions la séquence homologue 00:05:34.340 --> 00:05:35.340 du SRAS-2. 00:05:35.340 --> 00:05:39.990 Nous pensons alors qu'il s'agit du peptide de fusion du SRAS-2. 00:05:39.990 --> 00:05:44.250 Nous réalisons ensuite cette expérience et nous constatons qu'il peut également induire 00:05:44.250 --> 00:05:45.590 l'ordonnancement de la membrane et l'état du calcium. 00:05:45.590 --> 00:05:50.389 Nous avons ensuite comparé la capacité du SARS-1, du SARS-2 et du MERS à induire l'ordonnancement 00:05:50.389 --> 00:06:00.220 de la membrane, et nous avons constaté que le SARS-2 avait une activité plus élevée. 00:06:00.220 --> 00:06:05.550 Nous avons également détecté que la dépendance au calcium du peptide de fusion du SARS-2 00:06:05.550 --> 00:06:08.370 est très spécifique, comme nous l'avons montré ici. 00:06:08.370 --> 00:06:17.160 Les autres ions n'ont pas - ne peuvent pas induire l'ordonnancement de la membrane autant 00:06:17.160 --> 00:06:18.650 que le calcium. 00:06:18.650 --> 00:06:25.680 Ainsi, et avec une autre méthode, nous pouvons également savoir qu'un peptide de fusion 00:06:25.680 --> 00:06:35.710 du SRAS-2 lie deux ions calcium et que l'interaction entre le peptide de fusion du SRAS-2 et le 00:06:35.710 --> 00:06:40.560 calcium est plus forte que ces - ce dernier est le peptide de fusion du MERS. 00:06:40.560 --> 00:06:47.530 Nous allons également plus loin en formant un peptide de fusion distinct pour l'hôte 00:06:47.530 --> 00:06:49.889 par le biais d'un trimère de protéines. 00:06:49.889 --> 00:06:55.550 N'oublions pas que le peptide de fusion n'est qu'une partie de la protéine entière et 00:06:55.550 --> 00:07:04.100 que nous devons savoir si la protéine entière - le domaine du peptide de fusion de la protéine 00:07:04.100 --> 00:07:07.210 entière - fonctionne comme le peptide de fusion séparé. 00:07:07.210 --> 00:07:16.150 Nous utilisons donc une particule virale de pseudotype que nous appelons pp et qui exprime 00:07:16.150 --> 00:07:21.419 les trimères de la protéine spike sur la membrane. 00:07:21.419 --> 00:07:30.789 Nous les utilisons pour interagir avec les SUV qui ont une étiquette de spin sur la 00:07:30.789 --> 00:07:34.340 membrane et nous détectons alors l'augmentation de l'ordre de la membrane en temps réel. 00:07:34.340 --> 00:07:41.410 Ainsi, comme nous pouvons le voir ici, après avoir déclenché avec le calcium, nous pouvons 00:07:41.410 --> 00:07:45.750 constater le saut, et si nous utilisons d'autres ions, nous ne pouvons pas l'observer. 00:07:45.750 --> 00:07:49.970 Cela signifie donc que l'ancrage du trimère de la protéine S dans la membrane induit 00:07:49.970 --> 00:07:54.430 également l'ordonnancement de la membrane comme le peptide de fusion et qu'il s'agit 00:07:54.430 --> 00:07:57.380 d'un facteur très spécifique dépendant du calcium. 00:07:57.380 --> 00:07:59.480 Il s'agit donc d'une conclusion. 00:07:59.480 --> 00:08:06.630 Le peptide de fusion SARS-2 se situe en aval du site de clivage primaire S2 et peut induire 00:08:06.630 --> 00:08:11.620 la mise en ordre de la membrane de manière dépendante du calcium. 00:08:11.620 --> 00:08:18.069 Il se lie spécifiquement au calcium dans un rapport d'un peptide pour deux calcium 00:08:18.069 --> 00:08:25.090 et a une affinité de combat plus élevée et un effet de mise en ordre de la membrane 00:08:25.090 --> 00:08:29.320 plus fort que le peptide de fusion SARS-1. 00:08:29.320 --> 00:08:35.970 Nous avons également remarqué que le trimère de la protéine S2-S du SRAS induit également 00:08:35.970 --> 00:08:43.570 l'ordonnancement de la membrane comme le peptide de fusion séparé. 00:08:43.570 --> 00:08:49.420 Cette étude nous aidera donc à comprendre le mécanisme d'entrée du virus dans la cellule 00:08:49.420 --> 00:08:54.460 entière et nous indiquera également comment développer des médicaments et des vaccins. 00:08:54.460 --> 00:08:56.290 Voilà, c'était mon exposé. 00:08:56.290 --> 00:08:59.029 Je vous remercie de votre attention.